構建測序文庫是整個高通量測序(NGS)過程中尤為關鍵的一步,測序文庫的質量將直接影響后續測序及數據分析。通常,文庫構建方案要求對片段化的DNA進行末端修復,并在其兩端連上特定序列的接頭,擴增以形成滿足高通量平臺測序要求的文庫。高質量的接頭有利于片段DNA與接頭的連接,提高文庫構建效率。
成品接頭
百力格針對Illumina高通量測序平臺開發了超低污染率的UDI接頭(萬分之五和百萬分之一兩種防污染工藝),接頭定量準確且退火效率高。所有接頭均經過嚴格的質量控制和功能驗證,最大程度上保證文庫構建的穩定性和可重復性。
定制化接頭
百力格可以根據客戶需求定向研發和生產不同要求的接頭序列,包括短接頭、全長接頭、不同污染率要求、適用于不同建庫標準的專用接頭等。
接頭性能優勢
1. 退火效率高:優化的退火buffer,退火程序及專用的退火儀器,專用的退火效率檢測方法;
2. 連接效率高,建庫產量高;
3. 污染率低:接頭污染率在萬分之五以內,短接頭達到萬分之一水平;
4. 拆分率高:優化合成工藝,降低接頭oligo的合成錯誤率,達到了最好的數據拆分率;
退火效率
1. 針對NGS接頭優化的退火buffer,既能保證高的退火效率,又能保證接頭在退火buffer中能夠穩定的儲存
2. 針對NGS接頭退火優化的退火程序及大批量退火專用的退火儀器
3. 建立專用的退火效率檢測方法
百力格退火檢測(成品接頭)

1-2 為已退火接頭 F-R 為退火引物
連接效率
連接效率檢測方法 :
qPCR連接效率=接頭引物qPCR計算出 nM / 標品引物qPCR計算出 nM
連接效率高于競品
建庫產量高于競品
數據拆分

污染率
防污染工藝:
1. 百力格接頭防污染工藝,污染率低于萬分之五(96 UDI短接頭,平均污染率萬分之0.85)
2. 特殊污染源防控合成

引物合成堿基錯誤率

通過測序的方式檢測合成illumina接頭引物的堿基錯誤情況
拆分率
拆分率:97.92%



illumina 接頭包lane檢測拆分率(10nt,允許1錯配)
降低合成錯誤率,提升拆分率




