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多重PCR（Multiplex Polymerase Chain Reaction，mPCR）技術是一種在單一PCR反應中同時擴增多個靶序列的核酸檢測技術。這項技術自1988年首次提出以來，因其高效性、高通量和低成本的特點，在科學研究和疾病診斷等多個領域得到了廣泛應用。
雖然在多重PCR中能夠快速經濟地對多個靶點進行檢測，但同時也面臨著一些挑戰，如引物設計、反應條件優化、非特異性擴增和引物二聚體等問題。這就需要在設計引物時，對引物的特異性、長度、GC含量、退火溫度等進行精心設計和優化，以確保每對引物都能均衡地擴增目標片段。
Multibaits 通過生成盡量多的引物序列，多種指標篩選后得到質量合格引物，后通過最新的二聚體理論和退火優化算法得到更好的引物組合。
流程概要
流程主要包括三個階段：生成引物，篩選引物，所有引物組合。
產品特點
1. 專業的設計工具得到最優的多重引物設計；
2. 低堿基錯誤率工藝合成多重引物，確保高的擴增效率和低的非特異性擴增；
3. 引物自動化定量分裝混合，定量準確、混合均一；
4. 擴增體系支持最多擴增7000重；
5. 針對極個別位點會出現難覆蓋給出相應的策略進行解決，提高位點覆蓋率。
多重PCR 反應技術路線：兩輪擴增
第一輪 -- 對多個目標區域進行擴增，得到擴增子產物
第二輪 -- 擴增加上測序接頭
針對個別位點難覆蓋的策略
1. 免費設計新引物進行原有引物的替換和測試，解決引物擴增效果差、位點未覆蓋的問題。
2. 某些重要位點經過反復多次優化后可能仍然無法被覆蓋，將未覆蓋位點的引物挑選出來單獨擴增，之后合并。用于必須要檢出的目標位點。
多重引物設計
設計報告
多重擴增子引物設計工具鏈接：
多重擴增實例：132重
1. 比對率：Clean data 比對到參考基因組上的數據占比；
2. On_target：比對到目標區域的Read 數與比對到參考基因組上Read 數的比例；
3. 0.20*mean：目標區域內，測序深度達到平均測序深度的20% 區域占目標區域的比例。
整體解決方案
1. 人的多重擴增子測序可以設計、合成、擴增、測序驗證；
2. 病原tNGS，客戶提供病原參考序列，可以設計+合成，客戶端測序驗證。
